產(chǎn)品名稱：結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞
英文簡稱：RKO-AS45-1細(xì)胞

貨號：LZ-X969473
規(guī)格：T25
生長特性：

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
酵母綠原酸;Chlorogenicacid布氏菌疫苗培養(yǎng)基（液體）血管粘附蛋白1抗體

威爾酵母羅漢果苷ⅴ;MogrosideV培養(yǎng)基血管內(nèi)皮粘附分子抗體

威爾酵母龍膽苦苷;Gentiopicroside布氏活菌苗培養(yǎng)基（含瓊脂）血管內(nèi)皮生長因子抗體

威爾酵母雷公藤甲素;Triptolide雞副嗜血桿菌疫苗培養(yǎng)基血管內(nèi)皮生長因子受體1抗體

發(fā)酵性酵母雷公藤紅素;Celastrol鏈球菌疫苗培養(yǎng)基血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體

炭黑曲霉落新婦苷;Astilbin豬丹疫苗培養(yǎng)基血管內(nèi)皮生長因子受體-3

炭黑曲霉蘆丁;Rutin豬肺疫疫苗培養(yǎng)基波形蛋白抗體

炭黑曲霉克班寧;Crebanine馬丁肉湯血管活性腸肽抗體

炭黑曲霉苦龍膽酯苷;aMarogentin馬丁肉湯內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素/腹脂素/內(nèi)肥素

亮白曲霉1-咖啡?？鼘幩?1-Caffeoylq馬丁瓊脂內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素

泡盛曲霉煙色變種康普瑞汀磷酸二鈉;Combretasta仔豬副傷寒疫苗培養(yǎng)基T淋巴負(fù)調(diào)節(jié)蛋白之一抗體

泡盛曲霉康普瑞汀;Combretastatin培養(yǎng)基卵黃蛋白原抗體

金頭曲霉柯伊利素-7-O-葡萄糖苷;Chryso改良Minca培養(yǎng)基基礎(chǔ)血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體

鮮橙曲霉柯諾辛B;CorynoxineB雞支原體疫苗培養(yǎng)基一種新的絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK4抗體

無殼曲霉柯諾辛;Corynoxine無菌輔酶Ⅰ（NAD）溶液包含氧化還原酶的WW域抗體
RKO-AS45-1細(xì)胞烯酰輔酶A水合酶含結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體D-阿拉伯糖(標(biāo)準(zhǔn)品) Iron granules

腫瘤壞死因子受體超家族成員EDAR抗體D-果糖（標(biāo)準(zhǔn)品） Iron(III) citrate

自身抗原EDC4抗體D-四氫藥根（標(biāo)準(zhǔn)品） DL-Lactic acid

E3泛素蛋白連接酶EDD抗體D-松（標(biāo)準(zhǔn)品） DL-Lactic acid

胚胎外胚層發(fā)育蛋白EED抗體DL-薄荷（標(biāo)準(zhǔn)品） Ammonium citrate, tribasic

轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體Euojaponine D CAS, Chrome azurol S

內(nèi)皮脂肪酶抗體Eupeasaponin I Cytidine-5'-triphosphate (CTP), disodium salt

MYC啟動子結(jié)合蛋白1抗體Hederacolchiside A1(標(biāo)準(zhǔn)品) Cellulase

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白29抗體Hederacolchiside E Pyronin Y