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產(chǎn)品名稱：食管癌細胞
英文簡稱：KYSE450 細胞

貨號：LZ-X969747
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

銀杏酚酸Linoleic acid；亞油酸冰凍切片半胱氨酸蛋白酶12（CASPASE-12）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏內(nèi)酯AMethimazole；甲巰咪唑/甲硫噻唑冰凍切片半胱氨酸蛋白酶13（CASPASE-13）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏內(nèi)酯BBifonazole；聯(lián)苯芐唑冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-2（CASPASE-2）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏內(nèi)酯CQuercetin-3-O-b-D-glucose-7-O-b-D-gentiobiosiden；槲皮素-3-O-Β-D-葡萄糖-7-O-Β-D-龍膽雙糖苷冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-3（CASPASE-3）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏內(nèi)酯JSesamin；芝麻素冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-4（CASPASE-4）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏雙黃酮Berbamine hydrochloride；鹽酸小檗冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-5（CASPASE-5）活性原位熒光染色檢測試劑盒

吲哚Sinomenine Hydrochloride；鹽酸青藤堿冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-6（CASPASE-6）活性原位熒光染色檢測試劑盒

隱丹參酮Phlorizin；根皮苷冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-7（CASPASE-7）活性原位熒光染色檢測試劑盒

隱綠原酸Phloretin；根皮素冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-8（CASPASE-8）活性原位熒光染色檢測試劑盒

櫻草素L-Xylose；L-木糖冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-9（CASPASE-9）活性原位熒光染色檢測試劑盒

鷹嘴豆芽素AAdenosine 3',5'-cyclophosphate/cAMP；環(huán)磷酸腺苷冰凍切片膽色素格美林（Gmelin）染色試劑盒

硬飛燕草堿Geraniin；老鸛草素冰凍切片膽色素霍爾（Hall）染色試劑盒

硬脂酸甲酯Creatinine；肌酐/肌酸酐冰凍切片膽色素普歇（Pouchet）染色試劑盒

油酸α-Naphthoflavone；α-萘黃酮冰凍切片膽色素史汀（Stein）染色試劑盒

油酸甲酯Antipyrine；安替比林冰凍切片彈性纖維（ELASTIC）馬森（MASSON）染色試劑盒
KYSE450 細胞原癌因蛋白/活化蛋白1抗體卡維丁（標準品） Moxonidine

死亡活化蛋白抗體克拉霉素（標準品） Moxonidine

角蛋白19抗體克拉維 Nepafenac

角蛋白2抗體克林霉素磷酯(標準品) Nepafenac

角蛋白4抗體克霉唑(標準品) Nicarbazin

色素b245輕鏈抗體喹乙;喹酰（標準品） Nimustine HCl(ACNU)

5號染色體開放閱讀框44抗體醌式利福平（標準品） NVP-BEZ 235

心臟特異性絲氨蛋白酶抗體拉呋替?。藴势罚?/span> Pemirolast potassium

胞漿型磷脂酶A2抗體拉米夫定(標準品) Perindopril erbumine
注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。